Ajattelin töitä tehdessäni ottaa pari kuvaa blokkien leikkaamisesta ja kertoa vähän miten kudoksista saadaan ohuen ohuita leikkeitä ja niistä leikkeistä sitten katsottua soluja.
Meidän tutkimusryhmällemme tulee parafiinivahaan valettuja melanoomablokkeja ympäri Englantia. Emme siis itse käsittele tuorenäytteitä ollenkaan. Yleensä kun luomi/näyte leikataan, se fiksoidaan välittömästi laittamalla näyte formaliinia sisältävään purkkiin. Näin näytteessä olevat proteiinit ja solut säilyvät käytännössä muuttumattomana, eikä bakteerit yms. pääse tuhoamaan niitä. Tämän jälkeen näyte prosessoidaan, eli näytteissä oleva vesi poistetaan nousevalla alkoholisarjalla, xyleenillä ja lopuksi korvataan parafiinilla. Lopulta se on valmis valettavaksi kokonaan parafiiniin. Parafiini tukee näytettä leikkaamisvaiheessa. Tämä kaikki on kuitenkin jo tehty ennen kuin me pääsemme käsiksi näytteisiin.
Erilaisia ihonäytteitä parafiiniin valettuna
Blokit leikataan mikrotomilla. Siinä on erillinen kiinnistysalusta johon blokin saa kiinnitettyä. Yleensä blokki liikku vertikaalisti ylös ja alas ja samalla liikkuu halutun leikepaksuuden verran lähemmäksi terää. Myös muunlaisia mikrotomeja on. Terät voivat olla ruostumattomasta teräksestä tai jopa lasista ja niitä vaihdetaan vähän väliä, jotta terävyys pysyy. Niillä saa hyvin myös haavan sormeen.... :) Yleensä H&E-värjäyksiä varten halutaan 3-4µm paksuisia leikkeitä, mutta joskus leikataan myös paksumpia näytteitä.
Oikealla mikrotomi, keskellä pyöreä vesihaude
Jotta blokista saadaan leikattua ohuita näytteitä siististi, jäähdytetään blokkeja joko kylmälevyllä tai jäissä. Olen täällä työskennellessäni oppinut pitämään blokkeja styroxilaatikossa jossa on jäätä ja vähän kylmää vettä. Tuntuu toimivan aika hyvin ihonäytteille. Kylmälevy tuntuu joskus oleva jopa liian kylmä.
Kun leikkaaminen onnistuu ja leikkeitä syntyy, voidaan ne siirtää vesihauteeseen. Vesi on yleensä lämmintä, noin 45°C. Lämpimässä vesihauteessa leike suoristuu ja on näin ollen valmis nostettavaksi lasille.
Hyvässä leikkeessä ei mielellään olisi ruttuja, eikä ilmakuplia. Parafiinissa olevat ilmakuplat tai rutut eivät haittaa, mutta jos itse leikkeessä näkyy selvä ruttu, niin kannattaa vielä yrittää leikata parempi leike. Joskus kudoksista ei vain saa hyvää leikettä millään ja silloin on tyydyttävä vähän huonompaan tulokseen. Tärkeintä on kuitenkin olla tuhlaamatta koko näytettä värjäyksiä varten, sillä kudokselle saatetaan myöhemmin tehdä muitakin tutkimuksia. Tutkimuslupaa hankkiessamme on etukäteen sovittu kuinka monta leikettä saamme ottaa kustakin näytteestä ja mitä muita tutkimuksia saamme tehdä.
Lasilla oleva väritön kudosnäyte
Kun leike on lasilla, se ilmakuivataan ja laitetaan n. 70°C olevalle lämpölevylle. Siinä leike kiinnittyy lasiin ja pysyy lasilla värjäyksien ajan. Leikkeet voidaan sen jälkeen värjätä ja soluja voidan katsoa mikroskoopilla.
Värjättyjä kudosnäytteitä
